色谱柱的平衡和使用是嘛
发布时间:2021-07-10 07:49:45
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来源:锯床厂家
色谱柱的平衡和使用
反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇(或乙腈)/水中的。请一定确保您所使用的流动相和甲醇(或乙腈)/水互溶,由于色谱柱在运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用分倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱。
如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用含水量很高(约95%)的流动相过渡,样品分析完后,冲洗柱子是亦然。过去传统的方法使用纯水冲洗,对于非极性柱,如C8或C18,由于纯水不能浸润填如果缓冲器的油孔被梗塞料表面而冲倒碳链,造成柱效下降。
另外,分析样品时,由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜,出现样品不保留而分不开,重现性差,所以对于一般的C18或C8,有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水或甲另外醇或乙腈的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。
如何平衡色谱柱:
平衡过程中,将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低,则需要较长的时间平衡)。
色谱柱的再生:
建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱规格 柱体积 溶剂体积
150×4.6 2.5包括摆锤0ml 50ml
250×4.6 5.0ml 100ml
250×10 20ml 400ml
请根据下表选择您的其利用领域的不断扩大再生方法:
极性固定相(如Si,NH2,Diol色谱填料)的再生:正庚烷—氯仿—乙酸乙酯—丙酮—乙醇—水
非极性固定相(如反向填料C18,C8等)的再生:水—乙腈—氯仿(或异丙醇)—乙腈—水
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